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Schlüssel-Schloss-Prinzip
Betrachten Sie im Vorlesungsskript die Beschreibung des Schlüssel-Schloss-Prinzips und des Reaktionsmechanismus der Peptidhydrolyse durch eine Serinprotease. Einzelheiten zu den Reaktionsschritten finden Sie dort und im Kursheft. Typische Merkmale sind Säure-Basen-Katalyse und die Bildung eines kovalenten Zwischenproduktes.
In diesem Versuch wurden die Bedingungen so gewählt, dass ein stabiles Acylenzym entsteht. Wie wird dies erreicht?
Tipp: Vergleichen Sie den pH-Wert der Reaktionsbedingung mit den pKa-Werten der am Mechanismus beteiligten Aminosäuren.
Radioaktivität
Gelchromatographie
In diesem Versuch trennen Sie das Acylenzym vom überschüssigen Substrat p-Nitrophenyl-[3H]acetat und dem Produkt p-Nitrophenol mittels Gelchromatographie.
Beachten Sie die untenstehende Animation zum Experiment "Trennung von hoch- und niedrigmolekularen Substanzen durch Gelchromatographie" (Exp. 5.2) und das "Prinzip einer chromatographischen Trennung" zum Experiment "Verdauung von Triacylglycerinen mit Lipase und Nachweis der entstandenen Verdauungsprodukte" (Exp 3.4).
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