1. Bestimmung der Hämoglobinkonzentration

Geben Sie 0.1 ml der Hämoglobinlösung zu 4 ml Puffer und messen im Photometer die Extinktion bei 540 nm. geben Sie den gemessenen Wert ein:

Extinktion 540nm =

Der millimolare Extinktionskoeffizient bei 540 nm beträgt 59 mM-1cm-1. Ihre berechnete Hämoglobinkonzentration in der zu titrierenden Lösung ist demnach

Hämoglobinkonzentration = mM

Hilfe  

2. Titration

Sie haben die Konzentration der Hämoglobinlösung bestimmt und titrieren nun 25 ml davon durch portionenweise Zugabe (0.5 ml) von 0.02 M HCl. Nach jeder Zugabe notieren Sie den pH-Wert und tragen diesen nach der Titration in die Excel-Tabelle ein. Das Lösungsmittel titireren Sie in 0.2 ml Schritten. Klicken Sie auf die Abbildung, um die Excel-Datei zu laden.       



3. Berechnung der Pufferkapazität

Aus der Differenz der beiden Titrationskurven bestimmen Sie die Anzahl mmol HCl, die beim verwendeten Volumen und der gegebenen Konzentration zu einer pH-Änderung von einer Einheit führten.

Horizontaler Abstand bei pH 7.5: ml (Hb+Lsgm) - ml (Lsgm) =

Differenz der beiden Werte =


Soviele ml 0.02 N HCl braucht es, um in 25 ml Hämoglobinlösung der gegebenen Konzentration den pH-Wert von 7.5 auf 6.5 zu senken.

ml

Dies entspricht

mmol HCl

 

 

Beispiel

 

Berechnen Sie daraus die Pufferkapazität eines Liters einer 1 mM Hämoglobinlösung und die Pufferkapazität des Hämoglobins in einem Liter Blut.

-> richtige Antwort