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Dieser Versuch weist den Stärkeabbau nur qualitativ nach. Wie müsste das Experiment ausgebaut werden, um die Enzymaktivität der Amylase quantitativ bestimmen zu können?
a) Photometrische Bestimmung der Abnahme des blau-violetten Stärke-Iod-Komplexes mit der Zeit
b) Quantitative Benedictsche Reaktion zu verschiedenen Zeiten:
Zentrifugation nach der Reduktionsprobe und quantitative photometrische Bestimmung der verbrauchten Cu2+-Ionen (Abnahme der Intensität der blauen Farbe).
Wie könnten aus dem Stärkeabbau entstandene Produkte anders nachgewiesen werden?
Durch Maltase entsteht aus Maltose Glucose, welche enzymatisch bestimmt werden kann (Glucoseoxidase -> Exp. Enzymatische Bestimmung von Glucose)
Der Abbau von Glykogen durch Phosphorylase und "Debranching enzyme" liefert Glucose-1-phosphat und freie Glucose im Verhältnis von etwa 10:1. Wie ist dies zu erklären? Wie gross ist der Verzweigungsanteil im Glykogen?
"Debranching enzyme" besitzt zwei Aktivitäten:
Es ist eine Transglykosidase (α-1,4 -Bindung -> α-1,4 Bindung)
und es hydrolysiert Gluc- α-1,6-Bindungen (= debranching Aktivität) d.h. ein Transfer auf H2O statt auf Glucose (Glu-OH).
Verzweigung: durchschnittlich alle 10 Glucosereste eine α-1,6-Bindung.
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© bipweb Biochemische Praktika für Studierende der Medizin, Webunterstützung Biochemisches Institut der Universität Zürich, Impressum. letzte Änderung, PI, 08.09.2005 Rückmeldung |
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