Zwei Fragen aus dem Kursheft In diesem Versuch isolieren Sie das Acylenzym, welches bei tiefem pH stabil ist, da die Hydrolyse (Schritt 4 auf Seite 109) unter diesen Bedingungen nicht stattfinden kann (Histidin 57 ist protoniert). Würde eine Mutation von Histidin 57 zu Alanin in Chymotrypsin zum gleichen Effekt führen? Könnte in diesem Fall das Acylenzym auch unter leicht basischen Bedingungen isoliert werden? -> Antwort Nein, durch diese Muation würde schon der erste Schritt der Reaktion (Bildung des Acylenzyms) nicht stattfinden. Der Histidinrest wird auch benötigt, um das Serin 195 zu aktivieren, damit dieses die Peptidbindung angreifen kann. Welche Bedingungen müssen erfüllt sein, damit ein Enzym seine katalytische Aktivität ausüben kann? -> Antwort Das Enzym muss in seiner nativen Konformation vorliegen und die Reaktionsbedingungen (wie z.B. pH, Temperatur, Vorhandensein von Cofaktoren, Salzkonzentrationen, etc.) müssen für das Enzym geeignet sein. Erst in der nativen Konformation des Enzyms sind die an der Reaktion beteiligten Aminosäurereste an der aktiven Stelle räumlich so positioniert, dass sie die Reaktion katalysieren können.